Главная » Темы НИР » Внутренние гранты

Внутренние гранты

Тема: Поиск новых молекулярных мишеней для предиктивной диагностики мужского бесплодия

Государственный контракт №: ВнГр-07/2017-34
Дата начала работ: 01.01.2017 Дата окончания работ: 31.12.2018
Стоимость работ: 1 400 000 руб.
РК: АААА-А17-117061310098-1
Руководитель: Шкурат Т.П.
Исполнители: Александрова А.А., Бутенко Е.В., Косенко П.О., Лянгасова О.В., Шерчкова Т.А., Лебедева Ю.А., Герасименко М.В., Старкова Д.С.
Аннотация:

Совместный проект с Ереванским государственным университетом (г. Ереван, Армения).

Цель проекта: Изучение генетических и эпигенетических механизмов регуляции сперматогенеза и поиск новых молекулярных мишеней для предиктивной диагностики мужского бесплодия у пациентов из Армении и России.

По результатам анализа спермограмм и на основании руководства ВОЗ (WНO, 2010) будут сформированы группы пациентов. Оценка морфологии сперматозоидов будет проводиться в соответствии со схематическими изображениями, приведенными в работе Т. Кruger е.а., 1993. Спермограмма будет проведена на автоматическом спермоанализаторе SQA-V. ДНК и микроРНК будут выделяться из сперматозоидов с применением коммерческих комплектов реагентов «AmpliPrime-DNА-sоrЬ-АМ» и «miRNeasy Mini Kit», соответственно, согласно протоколу изготовителя. Полученные образцы будут храниться при температуре -80С° до анализа с применением количественной ПЦР на экспериментальной базе ЮФУ. Аллельные варианты исследуемых генов будут изучены с использованием наборов реагентов SNP-экспресс (Литех, Москва). Анализ основан на проведении реакций амплификации с двумя парами аллель-специфичных праймеров. Для анализа повреждений ДНК будет использован метод ДНК-комет (Hughes et al., 1996) и метод расчета индекса фрагментации ДНК (DFI) с использованием наборов Holosperm (Испания) с окраской по Райту. Анализ глобального метилирования ДНК будет проведен также с использованием метода ДНК-комет (Wentzel et al., 2010). Изображения комет будут регистрироваться видеокамерой (Variocam, РСО, Германия) и анализироваться с помощью программы Comet Assay IV (Version 4.3). Статистический анализ будет проведен с применением теста Манн-Уитни. Данные будут обрабатываться статистической программой IBM SPSS Statistics 19. Соответствие распределения частот генотипов равновесию Харди-Вайнберга будет определяться с использованием Hardy-Weinberg equilibrium calculator в программе (Rodriguez et al., 2009). Оценка различий в распределении аллельных вариантов генов в обследованных группах будет осуществляться по критерию χ2.